BS-0130人血小板衍生生長(zhǎng)因子(PDGF)ELISA試劑盒

　　以下是關(guān)于人血小板衍生生長(zhǎng)因子(PDGF)ELISA試劑盒的實(shí)驗(yàn)說(shuō)明書要點(diǎn)整理：

　　BS-0130 人血小板衍生生長(zhǎng)因子(PDGF)ELISA試劑盒

　　一、檢測(cè)原理

　　采用雙抗體夾心法(ELISA)：

　　預(yù)包被PDGF抗體的微孔板捕獲樣本中的PDGF

　　依次加入HRP標(biāo)記檢測(cè)抗體形成復(fù)合物

　　TMB底物顯色(藍(lán)色→黃色)，顏色深度與PDGF濃度正相關(guān)

　　450nm測(cè)OD值，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算濃度

　　二、試劑盒組成

　　典型配置包括：

　　預(yù)包被酶標(biāo)板(96孔)

　　PDGF標(biāo)準(zhǔn)品(凍干粉，通常20ng/ml)

　　酶標(biāo)抗體工作液

　　樣品稀釋液(10×/20×濃縮)

　　TMB底物溶液

　　終止液(2N H?SO?)

　　濃縮洗滌液(20×)

　　三、樣本處理

　　血清?：3000g離心10分鐘，避免溶血

　　血漿?：EDTA/肝素抗凝，3000g離心30分鐘

　　細(xì)胞上清?：3000g離心10分鐘去沉淀

　　保存?：2-8℃可存48小時(shí)，長(zhǎng)期需-20℃/-70℃凍存，避免反復(fù)凍融

　　四、標(biāo)準(zhǔn)曲線制備

　　標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋(通常6-8個(gè)濃度點(diǎn))

　　示例稀釋方案：

　　起始濃度20ng/ml

　　倍比稀釋至0.312ng/ml

　　空白孔用稀釋液對(duì)照

　　五、實(shí)驗(yàn)步驟

　　加樣?：標(biāo)準(zhǔn)品/樣本各50μl，設(shè)復(fù)孔

　　孵育?：37℃溫育1-2小時(shí)

　　洗滌?：自動(dòng)洗板機(jī)或手動(dòng)洗板5次

　　顯色?：加TMB避光反應(yīng)15-30分鐘

　　終止?：加終止液后30分鐘內(nèi)檢測(cè)

　　六、注意事項(xiàng)

　　所有試劑使用前需平衡至室溫

　　嚴(yán)格控制反應(yīng)時(shí)間和溫度

　　避免酶標(biāo)板孔間交叉污染

　　顯色后若出現(xiàn)沉淀需重新離心

　　不同批次試劑不可混用

　　七、結(jié)果分析

　　計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程(建議R2>0.99)

　　樣本濃度需乘以稀釋倍數(shù)

　　典型檢測(cè)范圍：0.312-20ng/ml，靈敏度約0.125ng/ml

　　注：具體操作請(qǐng)以實(shí)際試劑盒說(shuō)明書為準(zhǔn)，不同廠商可能存在參數(shù)差異。實(shí)驗(yàn)需配備酶標(biāo)儀、移液器、離心機(jī)等基礎(chǔ)設(shè)備。

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